Жыландын уусунда карбоксил эфир байланыштарын гидролиздөөчү ферменттер бар.Гидролиздин субстраттары фосфолипиддер, ацетилхолин жана ароматтык ацетат.Бул ферменттердин үч түрү кирет: фосфолипаза, ацетилхолинэстераза жана ароматтык эстераза.Жыландын уусундагы аргинин эстеразасы да синтетикалык аргининди же лизинди гидролиздей алат, бирок ал негизинен табияттагы белок пептиддик байланыштарын гидролиздейт, ошондуктан протеазага кирет.Бул жерде талкууланган ферменттер эфир субстраттарына гана таасир этет жана эч кандай пептиддик байланышка таасир эте албайт.Бул ферменттердин арасында ацетилхолинэстераза менен фосфолипазанын биологиялык функциялары көбүрөөк мааниге ээ жана толук изилденген.Кээ бир жыландын уусу күчтүү ароматтык эстеразалык активдүүлүккө ээ, ал p-nitrophenyl этил эфирин, а – же Р-нафталин ацетатын жана индол этил эфирин гидролиздей алат.Бул активдүүлүктүн биологиялык мааниси мындай турсун, көз карандысыз фермент же карбоксилэстеразанын белгилүү бир терс таасири тарабынан өндүрүлгөнбү азырынча белгисиз.Agkistrodon halys Japonicus ууну п-нитрофенил этил эфири жана индол этил эфири менен реакцияга киргизгенде, п-нитрофенолдун жана индол фенолдун гидролизаттары табылган эмес;Тескерисинче, бул эфирлер кобранын Zhoushan түрчөлөрүнүн жыландын уусу жана Bungarus multicinctus жыландын уусу менен реакцияга кирсе, алар тез гидролизденет.Белгилүү болгондой, бул кобранын уулары күчтүү холинэстераза активдүүлүгүнө ээ, алар жогорудагы субстраттардын гидролизине жооптуу болушу мүмкүн.Чынында, Mclean et al.(1971) Кобра үй-бүлөсүнө таандык көптөгөн жыландын уусу индол этил эфирин, нафталин этил эфирин жана бутил нафталин эфирин гидролиздей алат деп билдирди.Бул жыландын уусу: кобра, кара моюн кобра, кара эрин кобрасы, алтын кобра, египет кобрасы, падыша кобра, алтын кобра мамба, кара мамба жана ак эрин мамбадан (Д. ав азыркыга чейин чыгыш ромбола чаар жыланын билет.
Жыландын уусу сывороткадагы холинэстеразанын активдүүлүгүн аныктоочу субстрат болгон метил индол этил эфирин гидролиздей алат, бирок жыландын бул уусу холинэстераза активдүүлүгүн көрсөтпөйт.Бул кобранын уусунда холинэстеразадан айырмаланган белгисиз эстеразанын бар экенин көрсөтүп турат.Бул ферменттин табиятын түшүнүү үчүн андан ары бөлүү иштери керек.
1, Фосфолипаза А2
(I) Обзор
Фосфолипаза - глицерилфосфатты гидролиздей турган фермент.Жаратылышта фосфолипазанын 5 түрү бар, атап айтканда фосфолипаза А2 жана фосфолипаза
A. , phospholipase B, phospholipase C жана phospholipase D. Жыландын уусунда негизинен фосфолипаза A2 (PLA2), бир нече жыландын уусунда фосфолипаза В жана башка фосфолипазалар негизинен жаныбарлардын ткандарында жана бактерияларда кездешет.3-11-4-сүрөттө бул фосфолипазалардын субстрат гидролизине таасир этүүчү жери көрсөтүлгөн.
Фосфолипазалардын ичинен PLA2 көбүрөөк изилденген.Бул жыландын уусундагы эң көп изилденген фермент болушу мүмкүн.Анын субстраты Sn-3-глицерофосфаттын экинчи позициясындагы эфирдик байланыш болуп саналат.Бул фермент жыландын уусунда, аары уусунда, чаяндын уусунда жана жаныбарлардын ткандарында кеңири кездешет, ал эми PLA2 төрт үй-бүлөдөгү жыландын уусунда көп кездешет.Бул фермент эритроциттерди талкалап, гемолизди пайда кылгандыктан, ал "гемолизин" деп да аталат.Кээ бир адамдар PLA2 гемолитикалык лецитиназа деп да аташат.
Людике алгач жыландын уусу лецитинге ферменттер аркылуу таасир этип, гемолиздик кошулманы чыгара аларын аныктаган.Кийинчерээк Делезен жана башкалар.кобранын уусу аттын сывороткасына же сарысына таасир эткенде гемолиздик зат пайда болоорун далилдеген.Азыр PLA2 түздөн-түз эритроцит мембранасынын фосфолипиддерине таасир этип, эритроцит мембранасынын түзүлүшүн бузуп, түз гемолизди пайда кыла ала тургандыгы белгилүү;Ал ошондой эле гемолитикалык лецитинди өндүрүү үчүн сыворотка же кошулган лецитинге таасир эте алат, ал кызыл кан клеткаларына кыйыр гемолизди жаратат.PLA2 жылан ууларынын төрт үй-бүлөсүндө көп болсо да, ар кандай жылан ууларында ферменттердин мазмуну бир аз башкача.Чаар жылан (C
Жыландын уусу начар PLA2 активдүүлүгүн гана көрсөттү.Таблица 3-11-11 Кытайдагы уулуу жыландардын 10 негизги ууларынын PLA2 активдүүлүгүн салыштырууну көрсөтөт.
Таблица 3-11-11 Кытайдагы 10 жыландын уунун фосфолипаза VIII активдүүлүгүн салыштыруу
Жылан уусу
Май чыгаруу
Алифат кислотасы,
Цжумол/мг)
Гемолитикалык активдүүлүгү CHU50/^ г * мл)
Жылан уусу
Май кислоталарын чыгарыңыз
(^раол/мг)
Гемолитикалык активдүүлүк "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
он бир
Micracephal ophis
беш упай бир нөл
kalyspallas
8. 68
эки миң сегиз жүз
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Офиофаг ханна
үч упай сегиз эки
жүз кырк
Bnugarus fasctatus
7,56
эки жүз сексен
B. multicinctus
бир упай тогуз алты
эки жүз сексен
Viper a russelli
жети упай нөл үч
T, mucrosquamatus
бир упай сегиз беш
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Бөлүнүү жана тазалоо
Жыландын уусундагы PLA2дин мазмуну чоң жана ал жылуулукка, кислотага, щелочко жана денатурантка туруктуу, ошондуктан PLA2ди тазалоо жана бөлүп алуу оңой.Жалпы ыкма - адегенде чийки ууга гел фильтрациясын жүргүзүү, андан кийин ион алмашуу хроматографиясын жүргүзүү жана кийинки кадам кайталанышы мүмкүн.Белгилей кетчү нерсе, ион алмашуу хроматографиясынан кийин PLA2 тоңдуруу менен кургатуу агрегацияны пайда кылбашы керек, анткени тоңдуруу процесси көбүнчө системадагы иондук күчтү жогорулатат, бул PLA2 агрегациясын пайда кылуучу маанилүү фактор болуп саналат.Жогорудагы жалпы ыкмалардан тышкары, төмөнкү ыкмалар да кабыл алынган: ① Wells et al.② PLA2 субстрат аналогу жакындык хроматографиясы үчүн лиганд катары колдонулган.Бул лиганд Ca2+ менен жыландын уусундагы PLA2 менен байланыша алат.EDTA көбүнчө элюент катары колдонулат.Са2+ алынып салынгандан кийин, PLA2 менен лиганддын ортосундагы жакындык төмөндөйт жана ал лигандадан ажырайт.Башкалары 30% органикалык эритмени же 6моль/л карбамидди элюент катары колдонушат.③ Hydrophobic хроматография кардиотоксиндеги PLA2 изин алып салуу үчүн PheiilSephar0SeCL-4B менен жүргүзүлдү.④ Anti PLA2 антитело PLA2ге жакындык хроматографиясын жүргүзүү үчүн лиганд катары колдонулган.
Буга чейин көп сандаган жыландын уусу PLAZ тазаланган.Ту жана башкалар.(1977) 1975-жылга чейин жыландын уусунан тазаланган PLA2 тизмеленген. Акыркы жылдарда жыл сайын PLA2ди бөлүү жана тазалоо жөнүндө көп сандагы макалалар жарыяланып келет.Бул жерде биз кытай окумуштуулары тарабынан PLA бөлүү жана тазалоого багытталган.
Чен Юанконг жана башкалар.(1981) Чжэцзяндагы Agkistrodon halys Pallas уусунан үч PLA2 түрүн бөлүп алган, алар изоэлектрдик чекиттери боюнча кислоталуу, нейтралдуу жана щелочтуу PLA2 болуп бөлүнөт.Анын уулуулугуна ылайык, нейтралдуу PLA2 көбүрөөк уулуу болуп саналат, ал пресинаптикалык нейротоксин Agkistrodotoxin катары аныкталган.Alkaline PLA2 азыраак уулуу, ал эми кислоталуу PLA2 дээрлик эч кандай уулуулугу жок.Ву Сянфу жана башкалар.(1984) үч PLA2нин мүнөздөмөлөрүн салыштырган, анын ичинде молекулярдык салмагы, аминокислота курамы, N-терминал, изоэлектрдик чекит, жылуулук туруктуулугу, ферменттердин активдүүлүгү, уулуулугу жана гемолитикалык активдүүлүгү.Натыйжалар, алар окшош молекулярдык салмагы жана жылуулук туруктуулугун, бирок башка аспектилери боюнча олуттуу айырмачылыктар бар экенин көрсөттү.Фермент активдүүлүгү жагынан кислота ферментинин активдүүлүгү щелочтук ферменттин активдүүлүгүнөн жогору болгон;Алкалин ферментинин келемиштердин эритроциттерине гемолитикалык таасири эң күчтүү болгон, андан кийин нейтралдуу фермент, ал эми кычкыл ферменти гемолизден өткөн эмес.Ошондуктан, PLAZ гемолитикалык таасири PLA2 молекуласынын заряды менен байланыштуу деп болжолдонууда.Чжан Цзинкан жана башкалар.(1981) Agkistrodotoxin кристаллдарын жасашкан.Ту Гуанглян жана башкалар.(1983) изоэлектрдик чекити 7. 6 болгон уулуу PLA Фуцзяндагы Vipera rotundus уусынан бөлүнүп, тазаланганын жана анын физикалык жана химиялык касиеттерин, аминокислоталардын курамын жана 22 аминокислота калдыктарынын N. - терминал аныкталды.Li Yuesheng жана башкалар.(1985) Фуцзяндагы Viper rotundus уусынан дагы бир PLA2 бөлүп алып, тазалашты.PLA2 * суббирдиги 13 800, изоэлектрдик чекити 10,4, өзгөчө активдүүлүгү 35/xnioI/miri mg。 Лецитин субстрат катары болгондо, ферменттин оптималдуу рН 8,0 жана оптималдуу температура 65 °C. LD5 чычкандарга венага сайылган.Бул 0,5 ± 0,12 мг / кг.Бул энзим айкын антикоагулянттык жана гемолитикалык таасирге ээ.Уулуу PLA2 молекуласы 18 түрдүү аминокислоталардын 123 калдыктарынан турат.Молекула цистеинге (14), аспарагин кислотасына (14) жана глицинге (12) бай, бирок бир гана метионинди камтыйт жана анын N-терминалында серин калдыктары бар.Тугуанг тарабынан бөлүнгөн PLA2 менен салыштырганда, молекулалык салмагы жана эки изоферменттин аминокислота калдыктарынын саны абдан окшош, аминокислота курамы да абдан окшош, бирок аспарагин кислотасынын жана пролин калдыктарынын саны бир аз башкача.Гуанси падышасы кобра жыланынын уусу бай PLA2 камтыйт.Шу Юян жана башкалар.(1989) уудан PLA2 бөлүп алган, анын өзгөчө активдүүлүгү баштапкы уудан 3,6 эсе жогору, молекулалык салмагы 13000, курамы 122 аминокислота калдыктары, изоэлектрдик чекити 8,9 жана жылуулукка туруктуу.Эритроциттерге негизги PLA2 таасирин электрондук микроскоп байкоо, ал адамдын кызыл кан клеткаларынын мембранасына ачык-айкын таасирин тийгизет, бирок эчкинин кызыл кан клеткаларына эч кандай ачык-айкын таасир этет деп көрүүгө болот.Бул PLA2 адамдарда, эчкилерде, коёндордо жана гвинея чочколорунда кызыл кан клеткаларынын электрофоретикалык ылдамдыгына айкын артта калуучу таасирге ээ.Чен жана башкалар.Бул энзим ADP, коллаген жана натрий арахидон кислотасы менен шартталган тромбоциттердин агрегациясын токтото алат.PLA2 концентрациясы 10/xg/ml~lOOjug/ml болгондо тромбоциттердин агрегациясы толугу менен бөгөттөлөт.Эгерде жуулган тромбоциттер материал катары колдонулса, PLA2 20Mg/мл концентрациясында агрегацияга тоскоол боло албайт.Аспирин cyclooxygenase ингибитору болуп саналат, ал тромбоциттерге PLA2 таасирин токтото алат.PLA2 тромбоксан А2ди синтездөө үчүн арахидон кислотасын гидролиздөө аркылуу тромбоциттердин агрегациясын тоскоол кылышы мүмкүн.Чжэцзян провинциясындагы Agkistrodon halys Pallas уусу тарабынан өндүрүлгөн PLA2 эритмесинин конформациясы тегерек дихроизм, флуоресценция жана УК сиңирүү аркылуу изилденген.Эксперименттик натыйжалар бул ферменттин негизги чынжыр конформациясы башка түрлөрдөн жана тукумдардан бир эле түрдөгү ферментке окшош экенин, скелет конформациясынын ысыкка жакшы туруктуулугун жана кислота чөйрөсүндөгү структуралык өзгөрүү кайра кайтарымдуулугун көрсөттү.Активатор Са2+ менен ферменттин айкалышы триптофан калдыктарынын чөйрөсүнө таасирин тийгизбейт, ал эми Zn2+ ингибитору тескерисинче.Эритменин рН маанисинин ферменттин активдүүлүгүнө таасир этиши жогорудагы реагенттерден айырмаланат.
Жыландын уусун PLA2 менен тазалоо процессинде жыландын уусунда эки же андан көп PLA2 элиюциялык чокулары бар экендиги айкын көрүнүш.Бул кубулушту төмөнкүчө түшүндүрүүгө болот: ① изозимдердин болушуна байланыштуу;② PLA2дин бир түрү ар кандай молекулярдык салмактагы ар кандай PLA2 аралашмаларына полимерленген, алардын көбү 9 000 ~ 40 000 диапазонунда;③ PLA2 менен жыландын уусун башка компоненттеринин айкалышы PLA2ди татаалдантат;④ PLA2деги амиддик байланыш гидролизденгендиктен, заряд өзгөрөт.① Жана ② кеңири таралган, бир нече гана өзгөчөлүктөр, мисалы, CrWa/w жыландын уусундагы PLA2
Эки жагдай бар: ① жана ②.Үчүнчү шарт PLA2де төмөнкү жыландардын уусунда табылган: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, Палестина жылан, кум жылан жана коркунучтуу чаар жылан km。.
Иштин натыйжасы ④ электрофорез учурунда PLA2 миграциясынын ылдамдыгын өзгөртөт, бирок аминокислотанын курамы өзгөрбөйт.Пептиддер гидролиз менен бузулушу мүмкүн, бирок алар дагы эле дисульфиддик байланыштар менен байланышкан.Чыгыш чуңкур чаар жыландын уусу PLA2дин эки түрүн камтыйт, алар тиешелүүлүгүнө жараша a түрү жана p PLA2 түрү деп аталат.PLA2 бул эки түрүнүн ортосундагы айырма бир гана аминокислота болуп саналат, башкача айтканда, бир PLA2 молекуласында глутамин башка PLA2 молекуласында глутамин кислотасы менен алмаштырылат.Бул айырмачылыктын так себеби так болбосо да, жалпысынан ал PLA2 дезаминсиздигине байланыштуу деп эсептешет.Палестиналык жылан уусундагы PLA2 чийки уусу менен жылуу кармалса, анын фермент молекулаларындагы акыркы топтор мурункуга караганда көбүрөөк болуп калат.Жыландын уусунан бөлүнүп алынган C PLA2ден эки түрдүү N-терминал бар жана анын молекулярдык салмагы 30000. Бул кубулуш PLA2дин ассиметриялык димеринен келип чыгышы мүмкүн, ал чыгыш алмаздуу жыландын уусунда PLA2 түзүүчү симметриялык димерге окшош. жана батыш бриллианттуу жылан.Азия кобрасы көптөгөн түрчөлөрдөн турат, алардын айрымдары классификациясы боюнча так эмес.Мисалы, мурда Кобра Сырткы Каспий түрчөлөрү деп аталган нерсе азыр таанылды
Аны Каспий деңизинин сырткы кобрасына таандык кылуу керек.Көптөгөн түрчөлөр бар жана алар аралашып кеткендиктен, жыландын уунун курамы ар кандай булактардан улам бир топ өзгөрүп турат жана PLA2 изозимдеринин мазмуну да жогору.Мисалы, кобранын уусу
r ^ ll түрлөрүнүн эң аз дегенде 9 түрү PLA2 изозимдери, ал эми Каспий кобрасы түрчөлөрүнүн ууларында PLA2 изозимдеринин 7 түрү табылган.Дуркин жана башкалар.(1981) PLA2 мазмунун жана ар кандай жылан ууларында изозимдердин санын изилдеген, анын ичинде 18 кобранын уусу, 3 мамба уусу, 5 жыландын уусу, 16 жыландын уусу жана 3 деңиз жыланынын уусу.Жалпысынан алганда, кобранын уусунун PLA2 активдүүлүгү жогору, көптөгөн изозимдер бар.Жылан уусунун PLA2 активдүүлүгү жана изозимдери орточо.Мамба уусу менен жыландын уунун PLA2 активдүүлүгү өтө төмөн же PLA2 активдүүлүгү жок.Деңиз жыланынын уунун PLA2 активдүүлүгү да төмөн.
Акыркы жылдарда жыландын уусундагы PLA2 активдүү димер түрүндө бар экендиги билдирилген эмес, мисалы, чыгыш ромбофора чаар жылан (C. жыландын уусунда а жана P PLA2 түрү бар, экөө тең эки бирдей суббирдиктен турат. , жана димераза гана бар
Активдүүлүк.Шен жана башкалар.ошондой эле жыландын уунун PLA2 димери гана ферменттин активдүү формасы деп сунуштаган.Мейкиндик түзүлүшүн изилдөө, ошондой эле батыш алмаздуу жылан PLA2 димер түрүндө бар экенин далилдейт.Балык жегич кошулма
Жылан уусунан эки түрдүү PLA ^ Ei жана E2 бар, аларда 仏 димер түрүндө болот, димер активдүү, ал эми диссоциацияланган мономери активдүү эмес.Лу Инхуа жана башкалар.(1980) андан ары E. Jayanthi ж.б. физикалык жана химиялык касиеттерин жана реакция кинетикасын изилдеген.(1989) жыландын уусунан негизги PLA2 (VRVPL-V) бөлүп чыгарган.PLA2 мономеринин молекулярдык салмагы 10000, ал өлүмгө алып келүүчү, антикоагулянттык жана шишикке каршы таасирин тийгизет.Фермент PH 4,8 шартында ар кандай молекулалык салмактагы полимерлерди полимерлештире алат, ал эми полимерлөө даражасы жана полимерлердин молекулалык салмагы температуранын жогорулашы менен жогорулайт.96°Сте пайда болгон полимердин молекулалык салмагы 53100 болуп, бул полимердин PLA2 активдүүлүгү эки эсеге көбөйөт.
Посттун убактысы: Ноябрь-18-2022